टैबलेट टाक डीएनए पोलीमरेज़

हॉट स्टार्ट टाक डीएनए पोलीमरेज़ एक पुनः संयोजक टाक डीएनए पोलीमरेज़ है जिसे इसके विशिष्ट एंटीबॉडी के साथ मिलाया जाता है जो परिवेश के तापमान पर पोलीमरेज़ गतिविधि को रोकता है। अवरोधक के विशिष्ट बंधन के कारण, टाक डीएनए पोलीमरेज़ निष्क्रिय रूप में प्रदान किया जाता है। यह पीसीआर सेटअप और प्रारंभिक पीसीआर चक्र के दौरान कम तापमान पर बनने वाले गैर-विशेष रूप से एनील्ड प्राइमरों और प्राइमर-डिमर के विस्तार को रोकता है। पीसीआर की शुरुआत के दौरान डीएनए पोलीमरेज़ तापमान-निर्भर तरीके से (95A C पर) सक्रिय होता है। एक बार अवरोधक से अलग होने के बाद, टाक डीएनए पोलीमरेज़ अपनी गतिविधि को फिर से हासिल कर लेता है। यह हॉट टाक डीएनए पोलीमरेज़ को मात्रात्मक रीयल-टाइम पीसीआर के लिए आदर्श बनाता है। पैकेज टाक डीएनए पोलीमरेज़ (5U/I l) कैट नं। आरई-12-002 200 यू 10X बफर (Mg2+ फ्री) 1000 आई एल 100 एमएम एमजीसीएल 2 100 आई एल PCR प्रोटोकॉल की सिफारिश करें नोट: (1) इस प्रारूप में इस्तेमाल किया जाने वाला हॉट स्टार्ट टाक डीएनए पोलीमरेज़ 98a तक के उच्च तापमान को सहन करने में सक्षम है ताकि ग्राहक अपने पीसीआर साइकिलिंग में 10 सेकंड से कम समय के साथ 96a तक के डेनाचर तापमान का उपयोग कर सके. (2) डीएनए पोलीमरेज़ का यह प्रारूप पारंपरिक टाक की तुलना में अधिक निष्ठा का है। मॉडल प्रोटोकॉल: 0.2 मिलीलीटर पतली दीवार वाली पीसीआर ट्यूब में, जोड़ें टाक डीएनए पोलीमरेज़: 1i -l 10A बफर: 5i -l प्राइमर 1:2i -l प्राइमर 2:2i -l टेम्पलेट: 1i 10i -l H2O को इसमें जोड़ें: 50i -l निम्नलिखित स्थितियों में साइकिल चलाने से पहले थोड़ी देर स्पिन करें: प्रीडेनेचर: 95i सीए 15 मिनट साइकिलिंग: 94i CA 10s, (Tm-5) i CA 20s, 72i C (Kb/2a 60 में खंड की लंबाई) s, 30i 40 चक्र पोस्ट एक्सटेंशन: 72i सीए 3min समाप्त होने के बाद, कम से कम 2 मिनट के लिए तेज गति से स्पिन करें, फिर उचित एकाग्रता के साथ एगरोज़ जेल पर लोड करें। स्टोरेज: सभी घटकों को -20A C (नॉन-फ्रॉस्ट-फ्री) पर स्टोर करें। उपयोग करने से ठीक पहले कमरे के तापमान पर 10X बफर पिघलाएं और तुरंत फिर से फ्रीज करें.